Год публикации: 2023
Изменение морфологии форменных элементов периферической крови в зависимости от времени приготовления её мазка.
Автор статьи: Иван Галак г. Чита («Читинская государственная медицинская академия»).
В ходе реального эксперимента мы увидели, как с течением времени изменяется морфология крови, какие ошибки могут подстерегать при микроскопии долго стоявшей в пробирке крови.
Материалы и методы
Для эксперимента брали кровь из локтевой вены относительно здорового некурящего мужчины возрастом 21 год в 4 пробирки с К3 ЭДТА. 4 пробирки взяли для того, чтобы исключить попадание инородных частиц (бактериального или грибкого происхождения) из внешней среды, для каждого времени своя пробирка, до приготовления мазка их не открывали. Вакутейнеры аккуратно перевернули 8-10 раз для равномерного смешивания крови с антикоагулянтом, поместили в штатив на 30 мин для отстаивания. Сгустков и признаков гемолиза не было. Через 30 минут приготовили первый мазок и окрасили по Паппенгейму, затем кровь хранили при температуре +4 ̊С в холодильнике и делали мазки через 12, 24 и 48 часов, также окрашивая по Паппенгейму. Окрашенные мазки микроскопировали при увеличении 1000х с использованием масляной иммерсии, фото делали на камеру смартфона с использованием зума.
30 минут после взятия крови.
Рис. 1. При микроскопии мазка сделанного через 30 минут патологических изменений в морфологии форменных элементов выявлено не было, патологических изменений в лейкоцитарной формуле также не выявлено.
12 часов после взятия крови.
Рис. 2. Микроскопия мазка, сделанного спустя 12 часов показала наличие вакуолизации цитоплазмы нейтрофильных гранулоцитов
24 часа после взятия крови.
Рис. 3. Спустя 24 часа отмечаются уже более существенные изменения, появляются тени из разрушенных нейтрофилов, лимфоцитов и других лейкоцитов. На другой фотографии в карусели можно увидеть деформированные в ходе приготовления мазка лимфоциты.
Рис. 4. Спустя 24 часа. Вакуоли видны в виде неокрашенных участков цитоплазмы нейтрофила в результате чего они имеют «прострелянный» или «решетчатый» вид. Такая картина является следствием жировой дегенерации, что может быть на фоне тяжелого воспалительного или даже септического состояния пациента. Липидная природа вакуолей может быть подтверждена их суданофилией при окраске суданом черным Б. Вакуолизация может быть обусловлена и формированием фаголизосом в ходе фагоцитоза, и если объект фагоцитоза уже лизирован, то будет видно пустую вакуоль. Изменений морфологии других лейкоцитов и эритроцитов не выявлено.
При оценке морфологии эритроцитов можно увидеть незначительный анизо- пойкилоцитоз. Пойкилоцитоз преимущественно представлен эхиноцитозом. Эхиноциты являются неспецифической разновидностью пойкилоцитоза, они могут появляться и на фоне патологии, например, при тяжелых инфекциях, но могут быть и артефактом при длительном стоянии образца крови. Тени из разрушенных лейкоцитов могут быть ошибочно приняты за тени Боткина-Гумпрехта при хроническом лимфолейкозе, однако следует понимать, что при ХЛЛ они появляются из-за того, что на фоне данного заболевания лимфоциты изначально «хрупкие», поэтому они при приготовлении мазка разрушаются и дают тени Боткина-Гумпрехта. Здесь же вследствие длительного времени нахождения вне организма происходит дегенерация цитоскелета клеток, они становятся более хрупкими и часть из них разрушается при проведении стеклом, поэтому такие тени не являются признаком патологии, это артефакт.
48 часов после взятия крови.
Рис. 5. После 48 часов кровь крайне изменена! Выраженный эхиноцитоз.
Рис. 6. Спустя 48 часов наблюдается деформация лейкоцитов, разрушенные клетки (тени), а также признаки апоптоза лейкоцитов. У сегментоядерных нейтрофилы с признаками апоптоза отсутствует перетяжки между сегментами ядра и имеется резкий пикноз хроматина.
Рис. 7. Особо интересен феномен наличия «псевдонормобластов» - апоптотических нейтрофилов, имитирующие морфологию нормобластов (NRBC).
На рис.7 можно увидеть клетки, очень похожие на нормобласты,но они ли это? На самом деле нет! Это нейтрофилы в состоянии апоптоза, их хроматин слился в единую массу, он резко пикнотичен, может располагаться эксцентрично. Такая морфология способна ввести в заблуждение и как следствие ошибочная идентификация нормобластов. Отличить такие апоптозные нейтрофилы можно по цитоплазме, если это нейтрофил, то в его цитоплазме имеется зернистость, а у нормобластов цитоплазма абсолютно однородная, без каких-либо включений. Однако даже анализатор может принять их за нормобласты, поэтому следует быть внимательным.
Заключение
Таким образом, если от момента забора до исследования проходит длительное время, то следует ожидать искажение результатов. Если по каким-либо причинам кровь в лабораторию доставили спустя длительное время (более 24 часов), а анализ нужно делать, то работать с ней нужно особо внимательно, очень сложно в таком случае достоверно определить, а изменения появились из-за патологии или же это следствие длительной транспортировки, является ли данное изменение патологическим или же это артефакт? Среди множества факторов влияющих на точность анализа, немаловажным является время, но на практике, к сожалению, не всегда удается провести исследование за максимально короткий срок, что конечно же сказывается непосредственно на результате. При невозможности точно дифференцировать клетки крови, вследствие длительной транспортировки пробы, рекомендуется пригласить пациента на повторное взятие биоматериала.
Благодарности
Благодарю за любезную помощь в составлении плана эксперимента и в редактировании статьи - создателя проекта Лейкоформула, врача клинической лабораторной диагностики Зайцева Евгения Геннадьевича.